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建研土壤检测丨影响土壤中蛔虫卵检测结果的相关因素

作者: 广东建研环境监测股份有限公司 编辑: 建研环境监测 来源: 发布日期: 2020.08.07
信息摘要:
蛔虫病是人体常见的肠道寄生虫病之一。在中国,这是一个严重的公共卫生问题。严重危害人民健康,阻碍经济发展和社会进步。土壤被蛔虫卵污染是人类感染…

蛔虫病是人体常见的肠道寄生虫病之一。在中国,这是一个严重的公共卫生问题。严重危害人民健康,阻碍经济发展和社会进步。土壤被蛔虫卵污染是人类感染的主要来源,卫生部于 2011 年下发了《2011年全国农村环境卫生监测项目技术方案》。

要求对土壤中蛔虫卵进行检测。锦州市选取凌海市为监测点,从 2011 年开始,每年随机抽取20 个行政村进行采样,3 年共采集了 60 份样品。为配合监测工作的开展,科学有效的检测出蛔虫卵,本文通过对 60 份样品的检测结果进行分析,来探讨影响检测结果的相关因素。

1 材料与方法

1. 1 仪器
  CX31 型显微镜,ALLegra X -12 型离心机,XH - C 型漩涡混匀器。

1. 2 试剂
  5% 氢氧化钠溶液,饱和硝酸钠溶液。

1. 3 检测方法
  1. 3. 1 检测标准 采用饱和硝酸盐漂浮法进行检测,参考《粪便无害化卫生标准》( GB7959 -1987),《土源性线虫病防治技术方案》( 2010 年版)。

1. 3. 2 检测步骤 剔除菜叶、树皮等大杂物,压碎土样中的大颗粒; 然后用孔径 3 mm 的铜筛和孔径为2 mm的铜筛过筛,收集过筛后的土样。取 50 ml 大离心管,放入过筛后的土样 10 g,加5%氢氧化钠溶液至40 ml 或 45 ml 刻度线。放入 10 颗钢珠,用橡皮塞紧塞管口,在振荡器上振荡 15 min,可反复 3 次 ~4 次,待充分混合后,以 2000 r/min,离心 4 min。弃去上部的氢氧化钠,加入饱和硝酸钠溶液充分搅拌混匀,2000 r / min 离心 4 min,再加饱和硝酸钠溶液满至管口,覆上 18 mm ×18 mm 盖玻片。静置 15 min 后,将盖玻片迅速翻转取下,置于载玻片上镜检,同时再覆上第 2 张盖玻片,如此反复,共计数 3 张盖玻片。

1. 4 质量控制
  1. 4. 1 采样方法 统一 采用 1 m2范围内 5 点取样法,采集表层土壤,深度均在 5 cm ~20 cm 之间,采样量 >50 g.

  1. 4. 2 清洗铜筛 每次将筛过土壤的铜筛进行清洗,晾干后筛下 1 份样品。

1. 5 统计分析
  采用 SPSS 15. 0 统计软件进行数据分析。

2 结 果

2. 1 采样季节对检测结果的影响
2011 年 - 2013年锦州市共采集监测点土壤样品 60 份,每年采集 20份。2011 年 8 月份、2012 年 8 月份采样,2013 年 11月份采样。3 年间蛔虫卵的总体检出率为 58. 3%,2012 年检出率最高为 70% ,3 年间检出率差异无统计学意义( χ2= 1. 782,P > 0. 05) 。2012 年检出活卵数量最高,200 g 样品检出活卵数为 21 个,2013 年最低为 9 个,3 年间蛔虫卵存活率差异有统计学意义( χ2=8. 182,P < 0. 05) ( 表 1) 。
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将 8 月份采集的 40 份样品与 11 月份采集的 20份样品检测结果进行比较,11 月份采集样品的检出率和存活率均低于 8 月份,存活率下降比例较大。在采样方法统一的前提下,随着土壤温度的降低,蛔虫卵的检出率和存活率均有所下降( 表 2) 。
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2. 2 振荡工具的使用对检测结果的影响
挑选出检出蛔虫卵的 5 份平行样品进行振荡效果比较,振荡时间均为 15 min。从 5 份平行样品的检测结果中可以看出,手动振荡的检出数量均多于振荡器振荡。由此可见在本实验室的实验条件下,手动振荡的效果要好于振荡器的振荡效果( 表 3) 。
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2. 3 操作手法对检测结果的影响
玻片吸附前要求饱和硝酸钠溶液量要恰当,应达到满而不溢出; 覆上玻片后如果出现气泡,此时若马上换另一张玻片再吸,会降低检出率; 如果再补充液体试图将气泡赶走,成功率也会很低,多数情况下气泡未被赶走,而液体溢出,降低检出率。离心管盖的内壁由于震荡时液体会有一定的吸附,因此盖的内壁也需用硝酸钠溶液进行冲洗,否则会降低检出率。

2. 4 镜检对检测结果的影响
  镜下计数时要求检测人员掌握活卵和死卵之间的形态区别,应将含有幼虫的计为活卵,其他阶段的或单细胞的计为死卵。

3 讨 论

根据锦州市3年来采集的60个土样中蛔虫卵的检测结果,可以看出,在统一采样方法和检测方法、保证质量控制的前提下,采样季节对蛔虫卵的检测有影响。随着土壤温度的降低,土壤中的蛔虫卵大部分死亡。为获得较高的蛔虫卵存活率,检测采样时间为7~8月,与《辽宁省农村环境卫生监测项目技术方案》要求一致。振荡器的使用应根据实验室条件确定。测试前可以比较振荡器的振荡效果。从理想振荡工具的选择上,建议实验室更换振荡效果好的振荡器。检测率受操作方法、土壤性质、离心时间和次数的影响。

实验人员只有熟悉掌握检测原理和各种影响因素,进而采用科学的检测方法,才能获得理想的检测效果进而提高土壤中蛔虫卵的检出率。

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